оглавление

 

Исследование кала (копрологическое исследование) является наиболее распространенным, так как большая часть гельминтов паразитирует у человека в кишечнике или органах, с ним связанных, а их яйца выделяются с испражнениями.

 

Макроскопический осмотр фекалий

Осмотр фекалий производят с целью обнаружения крупных гельминтов, их члеников, обрывков стробилы, головок, выделяющихся самопроизвольно или после дегельминтизации. Для этого небольшие порции кала перемешивают с водой в плоской ванночке или чашке Петри и, просматривая на темном фоне, извлекают гельминтов пинцетом или пипеткой, переносят на предметное стекло в каплю разведенного глицерина для дальнейшего изучения.
Можно всю исследуемую порцию фекалий несколько раз размешать с водой в стеклянном цилиндре или горшке, ведре, поочередно осторожно сливая верхний слой отстоявшейся жидкости. После того как после очередного взмучивания и отстаивания жидкость станет прозрачной, ее сливают, а осадок просматривают небольшими порциями в стеклянной ванночке или чашке Петри на темном фоне. Такое исследование называется методом отстаивания.

 

 

Микроскопия испражнений

 

Это основной метод исследования фекалий для обнаружения личинок или яиц гельминтов. При этом применяют различные методы.
Испражнения для анализа должны быть доставлены не позже суток после их выделения, а при подозрении на стронгилоидоз (т. е. для обнаружения личинок) — немедленно. При нарушении этого правила диагноз в связи с разрушением яиц или личинок нередко поставить затруднительно или невозможно.
Для повышения достоверности исследования анализы нужно повторять несколько раз (ежедневно или с промежутками в 1—3 дня).

 

Нативный мазок

Небольшой кусочек кала переносят палочкой на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина (для его получения смешивают равное количество воды и чистого глицерина), растирают до получения равномерного прозрачного мазка. На одном стекле готовят два мазка (два препарата), всего просматривают не менее двух стекол, т. е. 4 препаратов.
При небольшом количестве яиц в испражнениях этим методом выявить их не всегда удается, т. е. могут быть получены ложноотрицательные результаты. Поэтому исследование кала на яйца гельминтов только методом нативного мазка не является полноценным и достоверным. 

 

Мазок с целлофаном по Като

По методу японского ученого К. Като 100 мг фекалий наносят на предметное стекло, покрывают специально обработанной полоской целлофана и придавливают резиновой пробкой так, чтобы фекалии не растеклись из-под целлофана.
Предварительно гидрофильный целлофан толщиной 22 мкм нарезают полосками площадью 8,2 см2 (с размером сторон 5,1 X 1,6 см) и погружают на сутки в раствор следующего состава: 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% водного раствора фенола. В 100 мл указанной смеси можно обработать до 5000 полосок, которые тут же можно и хранить в хорошо закрытом сосуде. В процессе первичного приготовления полосок необходимо следить, чтобы они не прилегали плотно друг к другу, так как это затрудняет пропитывание целлофана раствором глицерина.
Этот метод позволяет исследовать гораздо больший объем фекалий и с гораздо большей эффективностью, чем при обычном нативном мазке. Исследование (при малом или среднем увеличении микроскопа) необходимо проводить не позже чем через час после приготовления мазка, а в жаркую погоду — через 30—40 мин. Чрезмерное высыхание препарата и длительное просветляющее действие глицерина затрудняют микроскопию.
Рекомендуется с целью отработки техники приготовления мазка и подбора оптимального количества фекалий провести первоначальное «титрование». На несколько предметных стекол карандашом по стеклу наносят какие-либо цифры, а затем готовят мазки по Като, перенося на каждое стекло возрастающие навески фекалий (50, 60, 70, 80, 90 и 100 мг) таким образом, чтобы цифры оказались прикрытыми исследуемым материалом. Через 40—60 мин отмечают стекло, на котором сквозь мазок явственно видна написанная цифра. Соответствующую данному стеклу навеску фекалий принимают за исходную дозу, которую в последующих исследованиях необходимо использовать для приготовления мазка по Като.
Необходимо подчеркнуть, что в качестве просветляющей жидкости вполне достаточно использовать 50% водный раствор глицерина без добавления малахитовой зелени и фенола.

 

Метод закручивания по Шульману

Этот метод служит в основном для обнаружения в кале личинок гельминтов, в первую очередь стронгилоида, но можно выявить и яйца гельминтов. В небольшой баночке 2—3 г фекалий заливают пятикратным количеством воды и стеклянной палочкой очень быстро размешивают, стараясь не задевать стенки баночки. Затем палочку быстро вынимают и образовавшуюся на ее конце каплю жидкости переносят на предметное стекло для микроскопии. Следует только помнить, что исследовать нужно свежевыделенные испражнения.

 

Метод Бермана

Этот метод служит для выявления в фекалиях личинок гельминтов. 5—10 г исследуемых фекалий помещают на мелкоячеистой металлической сетке в стеклянную воронку, закрепленную на штативе. На узкий конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом. Воронку заполняют нагретой до 50°С водой так, чтобы нижняя часть сетки была в нее погружена.
Личинки из фекалий переходят в воду и скапливаются в нижнем конце трубки. Открыв через 2—4 ч зажим, собирают личинок в центрифужные пробирки, центрифугируют 2—3 мин и микроскопируют осадок.

 

Метод Фюллеборна

Этот метод эффективнее, чем просмотр только нативного мазка, хотя и сложнее. Являясь методом обогащения, дает возможность выявления яиц даже при небольшом их количестве. Предварительно готовят насыщенный раствор поваренной соли (хлористого натрия), растворяя 400 г ее в 1 л воды при кипении. Хранят его в закрытой бутыли.
Для проведения анализа в баночку (объемом 30— 50 мл) помещают 2—3 г фекалий и при помешивании палочкой доливают доверху насыщенным раствором соли. Полоской бумаги тут же снимают всплывшие крупные частицы. Через 45—60 мин проволочной петлей снимают поверхностную пленку и стряхивают ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина, готовя таким образом 4 препарата на двух стеклах. Для выявления яиц анкилостомид пленку рекомендуют снимать раньше — через 10—20 мин и исследовать фекалии не позднее первых суток после их выделения. Проволочную петлю после каждого анализа прожигают на спиртовке.
При другом варианте этого метода сверху на баночку помещают предметное стекло так, чтобы оно соприкасалось с поверхностью раствора. Всплывающие яйца гельминтов пристают к поверхности стекла, которое через 45—60 мин после отстаивания быстро снимают, переворачивают, помещают на более крупное стекло (чтобы не запачкать столик микроскопа) и исследуют.
Способом Фюллеборна хорошо обнаруживаются яйца нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентецов. Яйца же трематод и тениид всплывают плохо. Поэтому дополнительно просматривают 2—4 препарата из осадка, набирая его глазной пипеткой на 2 предметных стекла.
К недостаткам этого метода относится необходимость просмотра препаратов из поверхностной пленки и осадка, а также длительность отстаивания.

 

Метод Калантарян

Отличается от метода Фюллеборна только тем, что вместо раствора поваренной соли для приготовления насыщенного раствора применяют азотнокислый натрий, килограмм которого заливают 1 л воды и кипятят.
Техника анализа такая же, как и по Фюллеборну. Отличие заключается в том, что при методе Калантарян благодаря большой относительной плотности раствора всплывают яйца всех видов гельминтов, и осадок поэтому исследовать не нужно. Срок отстаивания также короче, всего 20—30 мин. Однако дороговизна препарата ограничивает применение метода. Правда, на базах «Сельхозтехники» можно достать натриевую селитру (т. е. технический азотнокислый натрий), применяемую в качестве удобрения и стоимость которой ниже. Неудобство метода еще состоит в том, что раствор на предметном стекле быстро кристаллизуется, что затрудняет его просмотр.
Для приготовления насыщенного раствора предложена смесь и другого состава (А. Н. Брудастов и Л. Н. Краснонос): натриевая селитра — 0,9 кг, калиевая селитра — 0,4 кг, воды горячей — 1 л. Относительная плотность раствора равна 1,47, что обеспечивает быстрое всплывание яиц всех видов гельминтов (раствор Калантарян имеет относительную плотность 1,38).
Можно также  использовать аммиачную или кальциевую селитру (также применяемые как удобрения) из расчета 1,5 кг на 1 л горячей воды (отн. пл. 1,3). Но так как удельный вес растворов при этом получается ниже, то и их эффективность уменьшается.
Во всех случаях рекомендуется вместо снятия пленки петлей накрывать уровень жидкости предметным стеклом (как было описано выше), что обеспечивает выявление яиц даже при низкой степени инвазии. Доказано, что количество яиц, снимаемых стеклом, больше, чем снимаемых петлей, и значительно выше по сравнению с нативным мазком. Следует учитывать также, что чем выше температура в помещении, тем быстрее всплывают яйца гельминтов.
Вместо стекла на поверхность жидкости, в которой отстаивается проба фекалий, можно помещать квадратики отмытой от эмульсии рентгеновской пленки и предварительно выдержанной сутки в 50% глицерине.

 

Метод культивирования личинок анкилостомид

Этот метод разработан японскими учеными и рекомендован Всемирной организацией здравоохранения для исследования на анкилостомидозы (без микроскопии испражнений).
По личинкам можно провести также дифференциацию некатора и анкилостомы.
Метод дает примерно такую же точность, как солевой, и может служить дополнением при специальных обследованиях в очагах этих гельминтозов.
На полоску фильтровальной бумаги (длина и ширина берется соответственно размеру пробирки, т. е. около 15X1,5 см), наносят свежие фекалии, оставляя оба конца чистыми. Затем полоску помещают в пробирку, на дно которой налита вода высотой примерно на 1/5 часть пробирки. Один чистый конец полоски погружают в воду, а другой закрепляют пробкой (рис. 83). Пробирку выдерживают 5—6 суток при температуре 28°С. Личинки собираются на дне пробирки, их видно с помощью лупы или даже невооруженным глазом. Детальное исследование проводят под микроскопом, убив предварительно личинок нагреванием жидкости в пробирке до 60°С.

 

 

 

 

Методы культивирования личинок анки- лостомид на листке фильтровальной бумаги в пробирке
Рис. 83. Методы культивирования личинок анки- лостомид на листке фильтровальной бумаги в пробирке:
а — пробка, закрепляющая бумажную полоску; б — бумажная полоска; в — проба фекалий на полоске; г — вода.

 

Метод обогащения с детергентами

Метод обогащения (т. е. концентрации) яиц гельминтов в испражнениях с помощью синтетических моющих средств (детергентов) предложен кафедрой общей патологии и терапии тропических болезней Центрального института усовершенствования врачей (Москва).
Сбор фекалий проводят во флаконы с плотно закрывающейся пробкой (объемом на 50—100 мл), куда предварительно до половины объема наливается 1 % водной раствор порошка «Лотос» или 1 — 1,5% раствор порошка «Экстра».
Доставленную пробу фекалий размешивают встряхиванием, отстаивают 30 мин, а затем центрифугируют 5 мин при 1000—1500 оборотах. Из осадка готовят не менее двух препаратов на предметном стекле и микроскопируют. Пробы, постоявшие в лаборатории сутки и больше, пригодны для исследования без центрифугирования.
Можно использовать и другие порошки, берется такое их количество, чтобы оно полностью растворялось в воде.
Этим методом выявляются яйца всех видов гельминтов, эффективность метода равна примерно эффективности метода Калантарян.

 

 

 

 

Организмы, отдельные клетки и различные образования, симулирующие яйца и личинки гельминтов

Рис. 84. Организмы, отдельные клетки и различные образования, симулирующие яйца и личинки гельминтов (для сравнения представлены яйца некоторых гельминтов).
/ — растительная клетка; 2 — спора растения; 3 — спора гриба (сморчка); 4 спора ликоподия; 5 — яйцо коловратки; 6 — пыльца хвойных деревьев; 7 спора белого гриба; 8 — растительная клетка; 9 — ооциста кокцидий: 10 — полосок; 11 — балантидий; 12 — клетка картофеля; 13 — неоплодотворенное яйцо аскариды; 14 — деформированная онкосфера тениид; 15 — яйцо фасциолы обыкновенной; 16 — яйцо острицы.

 

 

 

 

 

Реакция Казони положительная
Рис. 86. Реакция Казони положительная (по И. Я. Дейнека).

 

Консервация яиц гельминтов

Лаборантам или паразитологам приходится выезжать в населенные пункты сельской местности для массового обследования населения на гельминтозы. Однако микроскопия испражнений на месте не всегда возможна. Кроме того, в практике работы встречаются случаи, когда выявленные яйца гельминтов (или образования, их напоминающие) необходимо сохранить или направить на консультацию.
Для сохранения фекалий и содержащихся в них яиц гельминтов на длительный срок применяют консерванты. А. А. Красильников (1970) рекомендует использовать в качестве консервантов моющие синтетические средства (детергенты). Это, в частности, 1 % раствор «Лотоса» или 1,5% раствор «Экстры». Одну часть фекалий заливают пятикратным объемом одного из указанных растворов, в которых яйца и личинки гельминтов сохраняются не менее 6 месяцев. Раствор консервантов можно готовить заранее.
При необходимости сохранить препарат, приготовленный на предметном стекле в 50% глицерине, его накрывают покровным стеклом, края которого заливают конторским клеем и подсушивают два часа. Это обеспечивает сохранение яиц до нескольких недель (методика Е. М. Зазуляк).
Крупных гельминтов (остриц, аскарид и других нематод) консервируют в растворе Барбагалло (к 97 мл физиологического раствора добавляют 3 мл формалина). Цестод и трематод сохраняют в 70% спирте или в 1% растворе формалина.
Возможные ошибки при микроскопии испражнений
В процессе микроскопии испражнений могут встретиться различные образования, напоминающие яйца гельминтов или их личинки.
Так, иногда пузырьки воздуха принимают за онко- сферы тениид. Пузырьки — круглые, толщина «оболочки» и диаметр их различны, внутренняя часть совершенно прозрачна и лишена структуры, ободок черного цвета. Жировые капли также отличаются разнообразием размеров и бесструктурностью, хотя некоторые своей продолговатой формой могут напоминать яйца остриц.

 

Микроскопия крови

В мазках и толстой капле крови, приготовленных по обычной методике и окрашенных по Романовскому, могут быть обнаружены личинки филярий (микрофиля-

Более сложной является дифференциация растительных клеток, спор и пыльцы растений, пищевых частиц и других возможных включений. Растительные волоски могут быть приняты за личинок гельминтов. Указанные включения и частицы могут содержаться в испражнений, а также попасть в них во время приготовления препаратов.
Во всех сомнительных случаях необходимо учитывать размер, строение оболочек, цвет и морфологию обнаруженных образований, в случае необходимости проводить повторные анализы. Некоторые подобные образования представлены на рис. 84.

 

оглавление