оглавление

 

Исследование фекалий проводится с целью обнаружения простейших кишечника и складывается из нескольких этапов.

Сбор и хранение материала

Движение вегетативных форм простейших является одним из самых характерных и отличительных свойств, которое позволяет поставить правильный диагноз. Поэтому основным правилом, которое необходимо выполнять при всяких обстоятельствах, является следующее: исследованию должен подвергаться абсолютно свежий материал. Промежуток времени от момента выделения до исследования не должен превышать 15—20 мин, другими словами, в лабораторию должны доставляться фекалии в теплом виде. Под термином «теплые фекалии» надо понимать фекалии, не остывшие после выделения их из организма, но отнюдь-не подогретые искусственно.
Исследуемый материал собирают в чистую сухую посуду. Наиболее подходящими для этой цели являются картонные парафинированные стаканчики, которые после одноразового использования сжигают. Если фекалии собирают в стеклянную или фарфоровую посуду, то перед повторным употреблением посуду стерилизуют кипячением.
Вегетативные формы простейших весьма чувствительны к химическим веществам, и, если в посуде, куда собирают фекалии, остаются хотя бы следы дезинфицирующих средств, простейшие быстро погибают и распознавание их становится трудным, а иногда и невозможным.

Доставленный в лабораторию материал прежде всего подвергается макроскопическому осмотру. При этом отмечается консистенция кала, наличие слизи и крови. Если в лабораторию одновременно доставлено несколько проб фекалий, в первую очередь подлежат исследованию неоформленные фекалии с патологическими примесями, так как есть основание предполагать в них наличие вегетативных форм амеб.
Сохранять пробу до исследования надо при обычной температуре в вытяжном шкафу. Помещать в термостат не следует, так как при повышении температуры быстрее идет размножение бактерий, больше образуется продуктов метаболизма, что приводит к быстрой дегенерации простейших.
При каждом анализе с целью обнаружения простейших кишечника обязательным является исследование нативного препарата и мазка, окрашенного раствором Люголя.

 

Нативный мазок

Жидкие кровянисто-слизистые испражнения без видимой примеси фекальных масс могут быть исследованы без добавления физиологического раствора. Деревянной палочкой капля испражнений переносится на предметное стекло и закрывается покровным стеклом. Если испражнения полуоформленные или оформленные, нативный мазок готовят следующим образом: на предметное стекло наносят каплю физиологического раствора, деревянной палочкой берут кусочек испражнений из наиболее подозрительного (на наличие простейших) участка и в капле физиологического раствора готовят эмульсию, которая закрывается покровным стеклом.
Правильно приготовленный препарат должен быть опрятным, покровное стекло должно плотно прилегать к предметному с равномерным распределением жидкости между стеклами без ее выступания за пределы покровного стекла. Мазок должен быть умеренной толщины.
Микроскопическое исследование свежего мазка нужно проводить с обязательным соблюдением следующих правил. 1. Освещение препарата не должно быть„ ярким. Правильное освещение достигается соответствующим положением конденсора, который опускают тем больше, чем сильнее источник света. Используют также светофильтр. 2. Препарат просматривают сначала под малым увеличением микроскопа (ок. Х10 ), а потом с сухой системой большого увеличения. 3. Передвигать препарат надо с таким расчетом, чтобы не пропустить какие-либо участки мазка или не попасть повторно на уже просмотренное место. Наиболее удобно пользоваться препаратоводителем.
При правильном освещении даже под малым увеличением можно увидеть вегетативные стадии и цисты простейших, однако с уверенностью можно распознать лишь балантидий. После ориентировочного просмотра препарата под малым увеличением обязательно просматривают весь мазок под большим увеличением (ок. X 10,об. X 40).
Исследуя нативный препарат под большим увеличением, определяют стадии обнаруженных простейших, т. е. наличие вегетативных форм или цист. Вегетативные стадии в свежем неокрашенном мазке распознаются по движению. Поэтому обнаруженные формы сразу распределяют по классам: саркодовые, жгутиконосцы или ресничные. Более того, по особенностям передвижения можно внутри класса дифференцировать отдельные виды между собой. Например, из амеб, паразитирующш а кишечнике, лишь дизентерийная амеба обладает прогрессивно поступательным движением.
В нативном препарате надо также обращать внимание на фагоцитированные частицы. Например, из всех амеб в кишечнике человека только дизентерийная амеба обладает избирательным фагоцитозом, а именно она фагоцитирует эритроциты.
Цисты в нативном мазке отличаются от вегетативных стадий постоянной формой благодаря наличию оболочки. Строение цист в нативном препарате плохо заметно, не видны ядра. Лишь в цистах дизентерийной амебы хорошо заметны хроматоидные тела в виде блестящих палочек или глыбок. Поэтому, обнаружив цисты в нативном мазке, для определения их видовой принадлежности необходимо просмотреть препарат, окрашенный йодом.

 

 

Окраска раствором Люголя

Раствор Люголя имеет следующий состав: кристаллический йод 2 г, йодид калия 5 г, вода дистиллированная 100 мл. Вначале растворяют йодистый калий, затем добавляют йод. Хранят раствор в темной склянке с притертой пробкой.
Мазок, окрашенный раствором Люголя, готовят следующим образом. На то же стекло, на котором приготовлен нативный мазок, отступя от последнего на 2— 3           см, опускают каплю физиологического раствора, в которой при помощи деревянной палочки готовят эмульсию из фекалий. Затем в эту взвесь добавляют каплю раствора Люголя, накрывают покровным стеклом и исследуют.
Цисты окрашиваются в золотисто-коричневый цвет. На фоне цитоплазмы заметны ядра, их строение и число. Хорошо виден гликоген, окрашивающийся в разные оттенки коричневого цвета. Гликогеновая масса в цистах разных видов амеб имеет неодинаковую плотность, в зависимости от этого ее контуры и степень окрашенности бывают разной. Например, в цистах I. butschlii гликоген имеет резко очерченные контуры круглой формы и окрашен в темно-коричневый цвет.
Методика просмотра препарата, окрашенного раствором Люголя, такая же, как и нативного мазка. Следует учитывать, что при окраске раствором Люголя вегетативные стадии погибают и определяются с трудом.

 

оглавление