оглавление

 

Приготовление толстой капли крови
Для обнаружения кровепаразитов исследуют мазок и так называемую толстую каплю крови. Техника приготовления мазка крови описана в курсе общеклинических лабораторных исследований, поэтому ниже остановимся только на методике приготовления толстой капли.
При взятии крови следует тщательно соблюдать правила асептики. Кожу пальца протирают спиртом, после высыхания которого делают прокол иглой или специальным копьем одноразового действия, причем ранка должна располагаться поперечно к линиям кожного рисунка. В результате на месте укола свободно выступает капля крови. Нельзя пользоваться иглой Франка (к сожалению, она применяется в некоторых лабораториях), иглами от шприца и другими подобными инструментами, стерилизация которых затруднена или невозможна при текущей работе.

Стекла предварительно моют горячей водой с мылом или лучше современными синтетическими моющими средствами с последующим тщательным многократным прополаскиванием горячей водой. Чисто вымытые стекла протирают сухой хлопчатобумажной тканью, завертывают по 15—20 штук в бумагу и хранят в таком виде до употребления.
Перед взятием крови стекло протирают спиртом или эфиром и дают ему высохнуть. При изготовлении толстой капли стекло держат пальцами за края, чтобы не оставить на нем отпечатков пальцев.
После прокола иглой мякоти последней фаланги безымянного или среднего пальца левой руки к выступившей капле крови (первую каплю снимают сухой ваткой) прикасаются поверхностью сухого стекла.
Затем краем, другого стекла размазывают кровь, описывая круги с 10—15-копеечную монету. Слой крови не должен быть очень толстым (иначе после высушивания кровь трескается и может отпасть), но и не очень тонкой. Удачно изготовленная толстая капля должна быть такой толщины, чтобы через нее (после высушивания) слабо просвечивал крупный печатный текст. На одном стекле можно приготовить две толстые капли (рис. 81).
Препарат высушивают на воздухе в горизонтальном положении, предохраняя от пыли и мух.
Рекомендуется и другая методика приготовления толстой капли. На стекле делается мазок крови и, пока он влажный, на него наносится в центре капля крови, которая растекается правильным кругом. Препарат получается равномерным, лучше держится на стекле.
Толстые капли в отличие от мазков крови не фиксируют.

 

Приготовление рабочего раствора краски Романовского

Краска состоит из двух красящих веществ — азура и эозина, разведенных на метиловом спирте с добавлением глицерина. Выпускаемая в настоящее время промышленностью краска в жидком виде называется «азурэозин по Романовскому». Иногда» такую краску называют также краской Гимзы.
Перед употреблением заводскую краску разводят из расчета 2 капли на 1 мл дистиллированной воды. На один препарат требуется примерно 3—4 мл разведенной краски. Так как не все серии краски одинаковы, то в процессе работы уточняют необходимую степень ее разведения (на 1 мл воды берут от 1 до 3—4 капель заводской краски).

 

 

 

 

Приготовление мазка и толстой капли крови
Рис. 81. Приготовление мазка и толстой капли крови.
1—б—.этапы приготовления тонкого мазка; 7, 8, 9 — неправильно приготовленные мазки; 10—12—разные способы приготовления толстой капли.

 

На качество окраски влияет реакция дистиллированной воды. Наилучшие препараты получаются, если рабочий раствор краски Романовского готовится на воде слегка щелочной реакции (pH 7,1 — 7,2).
При кислой реакции воды эритроциты приобретают ярко-розовый цвет, при сильно щелочной они становятся почти синими.
При получении новой серии заводской краски рекомендуется развести ее в нескольких флакончиках на буферном растворе с pH 6,5—6,8—7,0—7,2. Затем окрашивают одновременно свежие мазки крови и сравнивают полученные результаты. При нормальной окраске эритроциты розового цвета с легким фиолетовым оттенком. Цитоплазма эозинофилов нежно-голубого цвета, зернистость в ней ярко розовая. Цитоплазма лимфоцитов голубая, ядра вишнево-красные, цитоплазма нейтрофилов бледно-розовая с обильной мелкой фиолетовой зернистостью.
На основании просмотра контрольных мазков подбирают наилучшие для данной серии краски значения pH воды.
Существует более простой, хотя и менее точный метод оценки качества воды. В пробирку наливают 5 мл дистиллированной воды и добавляют 2 капли спиртового раствора гематоксилина. Если вода приобретает розовато-фиолетовый цвет через 2 мин, то она пригодна для разведения краски. Если такой цвет появляется сразу—• вода щелочная, если позже, чем через 2 мин — вода кислая. Для получения нужной реакции к щелочной воде добавляют по каплям 1% .раствор уксусной кислоты, а к кислой — 1% раствор двууглекислой соды. При этом нужно каждый раз проверять pH воды с помощью гематоксилина, чтобы не передозировать добавляемые растворы кислоты или соды.
Более эффективно разведение краски буферным раствором. Предварительно готовят два основных раствора.

 

раствор А—натрий фосфорнокислый
двузамещенный (кристаллический ….. 23. 7 г
или безводный……………………………………. 9, 5 г
вода дистиллированная .                                1 -л
раствор Б—калий фосфорнокислый
одиозамешениый …. 9,07 г вода дистиллированная … 1л
В зависимости от взятого количества указанных растворов можно получить буферный раствор с нужным показателем pH:

Раствор А, мл

Раствор Б, мл

Вода, мл

pH

63

37

900

7,0

73

27

900

7,2

 

 

Окраска толстых капель крови

Предметные стекла помещают над плоской ванночкой на специальной подставке. Ее изготовляют из двух стеклянных палочек или трубочек (например, отработанных измерительных пипеток), концы которых с двух сторон соединены короткими резиновыми трубками. На горизонтально лежащие стекла сверху наливают пипеткой рабочий раствор краски Романовского. Можно окрашивать препараты и в вертикальном положении в широкой ванне, но при этом значительно увеличивается расход краски. Срок окраски обычно 25—35 мин. Чем выше температура в помещении, тем быстрее окрашиваются препараты, и наоборот. После окончания этой процедуры краску сливают, стекла переносят на вышеуказанные подставки и хорошо промывают слабой струей проточной воды.
Если толстые капли сохранялись более недели неокрашенными, то предварительно на препарат нужно налить дистиллированную воду. Через 10—15 мин гемоглобин эритроцитов переходит в воду, окрашивая ее в буроватый оттенок, а толстая капля становится белесоватой. Воду сливают, каплю осторожно прополаскивают чистой дистиллированной водой и затем осторожно наливают краску.
Препараты хранят в специальных коробках или в пачках, заворачивая их в неворсистую бумагу. Чтобы препараты не терлись друг о друга и не портились, их помещают стопкой так, чтобы окрашенная поверхность одного соприкасалась с неокрашенной стороной другого стекла. На один из краев стекла можно наклеить тонкую Полоску лейкопластыря, Что такЖе предохранит препараты от царапания.
После просмотра препаратов (если они предназначены для последующего хранения или пересылки) иммерсионное масло осторожно снимают ватой, смоченной бензолом, ксилолом, очищенным бензином или эфиром. Обязательно протирается и объектив микроскопа.

 

оглавление