оглавление

 

Методы обнаружения антител в сыворотке крови при гельминтозах в настоящее время используются с целью диагностики аскаридоза, трихинеллеза, эхинококкоза, альвеококкоза и цистицеркоза.
При трихинеллезе применяется несколько серологических реакций, методика проведения которых в соответствии с инструкцией Министерства здравоохранения СССР приводится ниже. Антиген из трихинелл выпускается в жидком виде на физиологическом растворе с исходным разведением 1 :1000. Наиболее доступной и простой является реакция кольцепрецип ита- ции (РКП). В узкие преципитационные пробирки с внутренним диаметром 3—5 мм наливают по 0,1 мл цельной или разведенной 1 :2 исследуемой сыворотки. В нескольких обычных пробирках готовят разведения антигена, для чего разливают по 0,5 мл физиологического раствора, а затем в 1-ю пробирку вносят 0,5 мл антигена (получается разведение 1:2, или 1:2000). Из 2-й пробирки 0,5 мл переносят в 3-ю пробирку, получая разведение 1 : 4, или 1 : 4000 и т. д. до 1 : 16 (1 : 16 000). Затем осторожно пастеровской пипеткой наслаивают антиген в возрастающих разведениях в объеме 0,1 мл на поверхность сывороток, не допуская их перемешивания.
При положительной реакции на границе сыворотки и антигена образуется беловатое непрозрачное кольцо преципитата. Срок наблюдения 2—3 ч в условиях оптимальной температуры от +18 до +24°С. Оценка реакции производится в зависимости от титра антигеиа, времени появления и степени четкости полученного кольца: резко положительная реакция — кольцо преципитата образуется при титре антигена свыше 1 : 16 000 и отчетливо видно невооруженным глазом; положительная реакция — кольцо образуется при титре антигена от 1 :2000 до 1:16 000 и видно невооруженным глазом; слабо положительная реакция — антиген преципитируется только В исходном основном разведении, результат учитывается невооруженным глазом; отрицательная реакция — кольцо преципитата не образуется и не видно даже g помощью лупы.

При отрицательном или сомнительном результате предыдущей реакции ставят реакцию преципитации в пробирках на холоду (РППХ). В тех же пробирках, в которых ставилась кольцепреципитация, ингредиенты смешиваются запаянным концом пастеровской пипетки или металлической петлей. Результаты преципитации на холоду учитывают с помощью лупы или агглютиноскопа через 4—5 ч или сутки после выдерживания в холодильнике при +2 — +5°С. При положительной реакции на дне и стенках конусовидной части пробирок образуется осадок — нежный беловато-дымчатый преципитат. Так же, как и при РКП, различают градации интенсивности реакции по тем же титрам (резко положительная, положительная, слабо положительная). В контрольных пробирках, где к исследуемой сыворотке вместо антигена добавлялся физиологический раствор, результаты должны быть отрицательными.
С тем же самым антигеном (который в настоящее время выпускает Белорусский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и гигиены) можно ставить реакцию связывания комплемента, техника проведения которой аналогична описанной выше (см. главу 10).
Для диагностики цистицеркоза применяют реакцию кольцепреципитации, преципитации на холоду и связывания комплемента с цистицеркозным антигеном. Постановка их та же, что и при трихинеллезе.
С целью диагноза эхинококкозаиальвеококкоза применяют реакцию латекс-агглютинации. Ниже приводится описание ее постановки в соответствии с инструкцией, утвержденной Министерством здравоохранения бывшего СССР.
Ингредиенты реакции и их приготовление. Реакцию ставят на буферном боратно-солевом растворе поваренной соли (pH 8,2). Буферный раствор готовят из 50 мл 0,1 М раствора борной кислоты и 5,9 мл 0,1 н. раствора едкого натрия, добавляя к смеси до 100 мл дистиллированную воду и на каждые 100 мл жидкости — 0,85 г поваренной соли.

Для приготовления 0,1 М раствора борной кислоты на 1 л дистиллированной воды следует брать 6,18 г сухой кислоты. Децинормальный раствор едкого натрия fdfO- вят путем добавления к 8 мл насыщенного раствора 1 л дистиллированной воды.
Латекс-синтетическая смола, жидкость молочно-белого цвета. Латекс-дивинилстирольный СКС-65-ГП содержит 45% сухого вещества, состоит из 65% дивинила и 35% стирола, размер частиц 0,08—0,12 мкм. Латекс-полистирольный (монодисперсный) содержит 1,2% сухого вещества (в основном полистирола), размер частиц 0,7— 0,85 мкм. Из технического латекса готовят рабочее разведение на дистиллированной воде: дивинилстирольный разводят 1 : 20, полистирольный — 1:2.
Антигеном служит стерильно взятая жидкость из эхинококковых пузырей человека или овец, которая в запаянных ампулах и в замороженном виде в холодильнике может храниться в лаборатории не менее года. Предварительно антиген каждой новой серии должен апробироваться на заведомо положительных и отрицательных сыворотках. При сборе жидкости от овец следует учитывать, что лучший антиген получается при взятии материала из многих пузырей (сколекссодержащих) от нескольких животных.
Постановка реакции складывается из следующих операций. Адсорбируют антиген на латексе. Для этого к 10 мл буферного раствора добавляют 0,1 мл рабочего разведения латекса и 0,5 мл эхинококковой жидкости. Смесь тщательно размешивают и в течение часа выдерживают при комнатной температуре, периодически встряхивая. Затем в центрифужные пробирки разливают испытуемую сыворотку, разведенную буфером в титрах от 1 :4 до 1 :64. Необходимые разведения готовят следующим образом. В первую пробирку наливают 0,75 мл, а в последующие — по 0,5 мл боратно-солевого буфера. Добавив в первую пробирку 0,25 мл сыворотки, получают ее разведение в соотношении 1:4. Перенося последовательно по 0,5 мл каждого разведения в следующую пробирку, получают ряд указанных выше титров. Из последней пробирки 0,5 мл жидкости выливают. Затем во все пробирки добавляют по 0,5 мл антигена, адсорбированного на латексе. Ставят также контроль — смесь 0,5 мл буфера и 0,5 мл антигена.

Все пробирки после тщательного встряхивания выдерживают 3 ч в термостате при 37°С и затем ночь в холодильнике при +4°С. После этого пробирки центрифугируют при 2500 об/мин в течение 3—5 мин и оценивают результат исследования.
Оценка реакции производится с учетом образовавшегося осадка. При отрицательном результате жидкость в пробирках имеет равномерно мутный вид, агглютинация отсутствует. При положительной реакции на дне пробирки образуется белый осадок из мелких частиц, видимых невооруженным глазом или под лупой с увеличением в 2—3 раза. При легком встряхивании осадок поднимается в виде хлопьев, надосадочная жидкость прозрачная или слегка мутная (опалесцирующая). Резко положительная реакция — осадок на дне обильный, состоит из крупных частиц, надосадочная жидкость полностью прозрачная. Степень агглютинации обозначают в крестах, при этом резко положительная принимается за + + +, отрицательная обозначается знаком минус. Диагностический титр реакции 1 : 8 и выше.
В настоящее время в производственном масштабе выпускается готовый эхинококковый диагностикум для латекс-агглютинации (Ставропольским научно-исследовательским институтом вакцин и сывороток). Диагностикум представляет собой смесь эхинококковой жидкости, адсорбированной на полистирольном латексе с боратно-солевым буфером. Выпускается в жидком виде по 5 мл в ампуле. Разведения перед употреблением не требуется. Методика постановки реакции латекс-агглю- тинации и оценка ее результата подобны описанному выше с той разницей, что процесс постановки предельно упрощается: к разведенной сыворотке сразу добавляют готовый диагностикум по 0,5 мл в каждую пробирку.
В случае, если имеется возможность получить свежие эхинококковые пузыри скота, можно поставить реакцию сколексопреципитации, предложенную Р. С. Шульцем и Р. Исмагиловой.
Из эхинококкового пузыря шприцем осторожно отсасывают жидкость, пузырь разрезают и извлекают зародышевых сколексов (имеющих вид мелкого белого песка). Каплю взвеси сколексов в физиологическом растворе помещают на предметное стекло с луночкой, туда же добавляют 1—2 капли исследуемой сыворотки, накрывают покровным стеклом, смазав его по краям вазелином для предупреждения высыхания препарата. Стекло в чашке Петри помещают в термостат. Через 6 и 24 ч препарат просматривают.
Если исследуемая сыворотка содержит эхинококковые антитела, то сколексы изменяют свой вид: они сплющиваются, так называемые известковые тельца (темные крупные зерна) собираются у заднего края; вокруг крючьев, заднего конца и нередко вдоль всего сколекса образуются преципитаты в виде нежного прозрачного осадка. При отрицательной реакции сколексы не изменяются.

оглавление